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酶聯(lián)免疫試劑盒在實驗過程中遇到的各種疑問!
更新時間:2017-03-31   點擊次數(shù):936次

大家在做ELISA試劑盒進(jìn)口大鼠實驗的時候,難免會遇到不同的問題,比如標(biāo)準(zhǔn)曲線不好,試劑盒的回收率,假陰性,假陽性,實驗的重復(fù)性不好等等。現(xiàn)在我們就來一一解答用戶朋友們在實驗過程中遇到的各種疑問!
曲線問題: 
 
1.OD值不正常:試劑盒未回溫,試劑盒回溫到25℃
                            溫度控制不好,控制正確溫度
                           孵育時間不準(zhǔn)確,控制孵育時間
                          洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增 加,洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干
                        陽光直射,對著風(fēng)直接吹,避風(fēng)避光
                        酶標(biāo)儀的波長錯誤,酶標(biāo)儀的波長450nm
                       抗體的稀釋錯誤,正確的稀釋抗體
                        水質(zhì)問題,用娃哈哈礦泉水代替
 
2.白   板:洗滌液配制錯誤,正確的配制洗滌液
             少加液體(錯加液體),正確的步驟加液體
           
 
3.無 梯 度:標(biāo)準(zhǔn)品也污染,換標(biāo)準(zhǔn)品點板
                     OD值不正常,控制溫度時間在做一次
                    人為點板,不要點板/
4.線 性 不 好:OD值不正常,控制溫度時間在做一次
                         
ELISA試劑盒進(jìn)口大鼠回收率:
1.空白管陽性高:樣本本身就是陽性樣本,換陰性樣本做回收率
                             空白管在實驗中被污染,實驗中防止交叉污染
                           水質(zhì)原因用,娃哈哈礦泉水代替
 
2.偏  高:添加量不準(zhǔn)確,的添加量
          添加濃度不適合,添加合適的濃度
           取液吹干量多,準(zhǔn)確的取液吹干
           取到其它相層液體,取需用相吹干
           復(fù)溶液未稀釋或加入量少,正確的稀釋復(fù)溶液
 
3.偏  低:添加量不準(zhǔn)確,的添加量
          添加濃度不適合,添加合適的濃度
          取液吹干量少,準(zhǔn)確的取液吹干
           復(fù)溶液稀釋錯誤或加入量多,正確的稀釋復(fù)溶液
假陰、陽性:

1,水質(zhì)原因:點復(fù)溶液驗證,用娃哈哈礦泉水代替
2,實驗操作原因: 吸取到其它相吹干,準(zhǔn)確的取液吹干
                  離心不*,延長離心時間
                  樣本的污染,更換樣本
                  乳化未處理*,溫浴(70℃)處理乳化現(xiàn)象
3,儀器試劑原因:離心管未清洗干凈,正確的洗滌器具
                  有機(jī)溶劑的影響,做試劑空白看影響結(jié)果
4,衍生化試劑原因(長時間衍生化試劑變質(zhì)),更換衍生化試劑
5,與曲線好壞相關(guān),,ELISA試劑盒進(jìn)口大鼠保證曲線的正常
 

 

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